Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 6:18 min • July 8th, 2025
Prenez un cerveau de souris perfusé contenant une tumeur.
L’étape de perfusion élimine les cellules immunitaires circulantes mais conserve les cellules infiltrées dans la tumeur.
Isolez le tissu contenant la tumeur.
Maintenant, dissociez mécaniquement le tissu.
La force mécanique détend le tissu, libérant les cellules.
Transférez le tissu dissocié dans un tube.
Centrifugez et jetez le surnageant contenant les débris.
Remettre le tissu en suspension dans une solution de digestion contenant de la collagénase et de la DNase.
La collagénase dégrade la matrice extracellulaire, libérant les cellules. La DNase dégrade l’ADN contaminant.
Ajoutez un tampon pour arrêter l’activité enzymatique.
Filtrer la suspension pour éliminer les agrégats cellulaires et obtenir une suspension unicellulaire.
Centrifugez et jetez le surnageant.
Remettez les cellules en suspension dans un milieu à gradient à haute densité. Maintenant, superposez avec un milieu de gradient de plus faible densité, formant un gradient de séparation avec une interface claire.
Centrifuger pour séparer les couches. Les cellules immunitaires se rassemblent à l’interface entre les milieux à gradient tandis que les débris cellulaires
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