Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:07 min • July 8th, 2025
Commencez avec une plaque recouverte d’ECM et ensemencez des grappes de cellules souches pluripotentes humaines dans un milieu de croissance contenant des inhibiteurs de la Rho-kinase.
L’ECM améliore l’attachement cellulaire, tandis que les inhibiteurs bloquent les rho-kinases, empêchant la mort cellulaire apoptotique et favorisant la survie et la prolifération cellulaires.
Introduire un milieu de différenciation neurale pour induire la différenciation des cellules souches en cellules progénitrices neurales.
Traiter avec une solution de détachement ; les enzymes contenues dans cette solution dégradent l’ECM et le contact cellulaire, libérant les cellules.
Transférez-les dans une fiole non enrobée contenant des inhibiteurs de la rho-kinase.
Les inhibiteurs facilitent la survie cellulaire et l’agrégation spontanée en structures tridimensionnelles ou sphéroïdes.
Complétez les sphéroïdes avec un milieu de différenciation neurale riche en facteurs de croissance, permettant aux cellules progénitrices neurales de se différencier en progéniteurs d’astrocytes et de former des astrosphères.
Régulièrement, ajoutez une solution de détachement pour dissocier les astrosphères en amas plus petits
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