Replacage de neurones différenciés dérivés de cellules souches pluripotentes humaines

Commencez avec une grande plaque de culture contenant des neurones différenciés dérivés de cellules souches pluripotentes humaines avec un réseau neuronal dense.

Incuber ces neurones avec des enzymes protéolytiques douces pour les détacher de la plaque, en les soulevant comme une feuille.

Avec une incubation continue, les enzymes perturbent partiellement les connexions cellulaires, relâchant les réseaux neuronaux.

Ajouter un milieu de culture pour arrêter l’activité enzymatique.

Pipetez à plusieurs reprises les neurones détachés pour les séparer les uns des autres.

Filtrez les neurones à travers une passoire cellulaire pour éliminer les amas de cellules et collecter les neurones individuels.

Centrifugez et retirez le surnageant. Remettez-les en suspension dans un milieu de croissance.

Pour le replacage, ensemencez ces neurones sur un polymère et une plaque multipuits recouverte de protéines d’adhésion. Incuber pour permettre leur fixation.

Les neurones utilisent les nutriments du milieu pour rester viables. Remplacez régulièrement le milieu de culture pour maintenir les niveaux de nutriments.

Incuber davantage pour permettre la maturation neuronale et la formation de connexions ent