Génération de progéniteurs neuraux à partir de cellules souches embryonnaires de souris par la méthode de la goutte suspendue
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:09 min • July 8th, 2025
Prenez une suspension de cellules souches embryonnaires de souris.
Centrifugez, retirez le surnageant et remettez les cellules en suspension dans un milieu de différenciation neurale.
Placez les gouttelettes de la suspension sur la face intérieure du couvercle d’une plaque de culture.
Ajoutez un tampon sur la plaque inférieure pour éviter que les gouttelettes ne sèchent. Placez le couvercle sur la plaque inférieure, formant une culture de gouttes suspendues, et incuberez.
En raison de la gravité, les cellules se regroupent et forment des agrégats tridimensionnels appelés corps embryoïdes ou EB.
Placez les gouttelettes dans une plaque contenant le milieu de différenciation et incubez sous agitation pour la croissance des EB.
Centrifuger et retirer le milieu, remettre en suspension les EB dans le milieu de différenciation complété par de l’acide rétinoïque, les transférer dans une plaque de culture et incuber.
L’acide rétinoïque pénètre dans les cellules et déclenche la formation d’un complexe de transcription. Le complexe induit l’expression des gènes, déclenchant la différenciation en cellules progénitrices neurales.
Les EB différenciés sont prêts pour les applications en aval.
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