Isolement de colonies de cellules progénitrices neurales induites dérivées de fibroblastes humains adultes
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:38 min • July 8th, 2025
Commencez par une culture adhérente de colonies de cellules progénitrices neurales induites dérivées de fibroblastes humains adultes dans une plaque multipuits recouverte de laminine.
Lavez les colonies avec un tampon pour éliminer les cellules non adhérentes, puis ajoutez un tampon frais.
Grattez autour des colonies individuelles pour éliminer les cellules environnantes.
Transférez les colonies dans des puits frais recouverts de laminine contenant un milieu de neuroinduction.
Désagréger mécaniquement les colonies pour obtenir une suspension unicellulaire.
La laminine, une protéine de la matrice extracellulaire, interagit avec les protéines de surface des progéniteurs, facilitant l’adhésion cellulaire à la surface du puits.
Ajoutez une petite molécule inhibitrice qui pénètre dans les cellules et bloque des protéines kinases spécifiques, empêchant ainsi l’apoptose cellulaire.
Les facteurs de croissance et les petites molécules présentes dans le milieu de neuroinduction facilitent la prolifération des progéniteurs.
Remplacez périodiquement le milieu pour reconstituer les nutriments, facilitant ainsi la prolifération continue des progéniteurs.
Une culture confluente, ou une couche cel
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