Différenciation des cellules progénitrices neurales induites en astrocytes

Prenez une culture de cellules progénitrices neurales induites, ou iNPC, sur une plaque multipuits recouverte de protéines de matrice extracellulaire.

Remplacez le média par un média à induction gliale et incubez. Les facteurs de croissance et les hormones dans le milieu facilitent la différenciation des iNPC en cellules précurseurs gliales.

Changez de média tous les deux jours pour la prolifération cellulaire. Ensuite, remplacez le milieu par un milieu astrocytaire et incuberez.

Des nutriments spécifiques et des facteurs de croissance dans le milieu entraînent la différenciation des cellules précurseurs gliales en astrocytes.

Les changements de milieux tous les deux jours favorisent la maturation des astrocytes.

Changez le milieu en neuro-diff-medium lorsque les cellules sont confluentes à environ 70 % et continuez à changer de milieu tous les deux jours pendant trois semaines. Ne divisez pas les cellules lors de la différenciation. Après trois semaines, les cellules devraient exprimer le marqueur neuronal TuJ1.

Pour obtenir des neurones plus matures et des sous-types neuronaux, continuez la différenciation jusqu’à trois mois. Pour la différenciation des iNPC spécifiquement vers une lignée gliale, changer le milieu en milieu d’induction gliale, y compris 20 nanogrammes par millilitre de facteur de croissance épidermique pour induire la différenciation en cellules précurseurs gliales. Retirez la moitié du milieu et remplacez-la par un milieu frais tous les deux jours pendant environ deux semaines.

Pendant cette période, les cellules doivent être divisées de 1 à 3 en présence de 10 inhibiteurs de la rho-kinase micromolaires lorsque la confluence de 100 % est atteinte. Après deux semaines, différenciez davantage les cellules en astrocytes en changeant le milieu en milieu astrocytaire disponible dans le commerce lorsque les cellules sont presque confluentes et en continuant à changer de milieu tous les deux jours. Environ sept jours plus tard, les cellules commencent à exprimer des marqueurs astrocytaires.