Technique de génération de cellules progénitrices neurales à partir de cellules souches embryonnaires de souris

Prenez des cellules souches embryonnaires de souris, ou mESC, en suspension dans un milieu de différenciation, et incubez.

Dans la culture en suspension, les CSEm s’agrègent pour former une structure appelée corps embryoïde ou EB.

Les EB sont des agrégats tridimensionnels qui imitent un embryon en développement et peuvent être différenciés en cellules neurales.

Transférez les EB dans un tube et laissez-les se déposer par gravité.

Retirez le milieu appauvri en nutriments, remettez les EB en suspension dans un milieu frais et transférez-les dans une boîte de culture.

Incuber la culture en suspension pour faciliter la croissance des EB.

Transférez les EB en suspension dans le milieu sur une plaque multipuits. Les puits sont recouverts d’une protéine d’adhésion, ce qui permet aux EB de se fixer.

Introduire de l’acide rétinoïque, qui pénètre dans les cellules et déclenche la formation d’un complexe de transcription.

Le complexe induit l’expression des gènes, favorisant la différenciation des cellules en cellules progénitrices neurales, ou NPC, qui présentent des processus cellulaires étendus.

Ajoutez 1,5 million de cellules souches embryonnaires de souris dans une boîte bactérienne non