Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:15 min • July 8th, 2025
Commencez avec une plaque multipuits enrobée de gélatine contenant des cellules progénitrices neurales dérivées de cellules souches embryonnaires de souris dans un milieu de différenciation basale riche en nutriments.
Les cellules progénitrices utilisent ces nutriments du milieu pour maintenir leur viabilité.
Incuber pour permettre la fixation des cellules à la surface recouverte de gélatine, puis laver pour éliminer les cellules détachées et les débris.
Introduisez un milieu de différenciation basale complété par un agent stabilisant, des nutriments supplémentaires et des facteurs de croissance neurale cruciaux pour la différenciation cellulaire, puis incuber.
Les cellules progénitrices consomment les nutriments et les facteurs de croissance, initiant leur différenciation en neurones qui commencent à étendre leurs processus cellulaires.
Parallèlement, l’agent stabilisant interagit avec les métabolites toxiques et protège les neurones en développement des dommages oxydatifs, préservant ainsi leur viabilité.
Remplacez régulièrement le milieu pour maintenir les niveaux de nutriments.
Au fil du temps, les neurones mûrissent, développant des axones - les processus cellulaires plus longs.
De plus, ils développent également des dendrites, les processus cellulaires plus courts, confirmant la différenciation des cellules souches en neurones.
Ensemencez environ 500 000 dérivés de cellules souches embryonnaires de souris dans 2 millilitres de milieu de différenciation basale par puits sur les plaques recouvertes de gélatine à 0,1 %. Divisez au hasard les dérivés en trois groupes afin de tester trois protocoles de différenciation de phase II. Incuber la plaque pendant six heures. Ensuite, lavez les cellules deux fois avec 2 millilitres de PBS et ajoutez 2 millilitres de milieu de différenciation basale, N2 B27 milieu 1 ou N2 B27 milieu 2 à chaque puits, selon le protocole. Placez les plaques dans l’incubateur et laissez les cellules se différencier pendant encore 10 jours, en changeant le milieu correspondant tous les deux jours.