Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:32 min • July 8th, 2025
Introduire des fibroblastes dermiques humains adultes ou aHDF, en suspension dans un milieu de fibroblastes, dans une microplaque recouverte de protéines de matrice extracellulaire. Incuber pour permettre l’adhésion cellulaire.
Introduire un vecteur lentiviral transgénique. Lors de l’internalisation dans la cellule hôte, l’ARN viral est retranscrit en ADN, qui s’intègre dans le génome de l’hôte.
L’ADN viral exprime des facteurs de transcription et des ARN en épingle à cheveux courts, ou shRNA. Les nucléases cellulaires transforment les shRNA en petits ARN interférents ou siRNA.
Les siARN générés dégradent l’ARNm codant pour les répresseurs transcriptionnels, inhibant ainsi leur expression et permettant l’activation des gènes de différenciation neuronale.
Les facteurs de transcription activent les gènes, favorisant la différenciation neuronale des aHDF.
Retirez le milieu contenant les vecteurs non internalisés.
Ajoutez un milieu de conversion neuronale précoce contenant des facteurs de croissance et de petites molécules qui induisent la différenciation en cellules neuronales.
Remplacer le milieu par un milieu de conversion neuronale tardive contenant des facteurs neurotrophiques pou
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