JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 4:13 min • July 8th, 2025
Prenez le tissu du glioblastome humain, une tumeur cérébrale primitive provenant des cellules gliales.
Lavez le tissu à l’aide d’un milieu de traitement glacé pour éliminer le sang résiduel.
Coupez le tissu en morceaux et insérez-le dans un moule d’enrobage contenant de l’agarose fondu.
Refroidissez le moule, permettant à l’agarose de polymériser et de former une matrice de gel stable.
Retirez le bloc de tissu du moule et fixez-le sur la plaque d’échantillon d’un vibratome.
Ajoutez le fluide de traitement glacé pour immerger le bloc. Passez un mélange gazeux oxygéné pour aérer le milieu, en maintenant la viabilité des tissus.
Sectionnez le tissu tumoral intégré en fines tranches.
Transférez une tranche dans une boîte de Pétri contenant le milieu de traitement glacé pour préserver l’architecture tissulaire.
Ensuite, plaquez la tranche de tissu sur un insert de membrane perméable dans un puits contenant un milieu de maintenance de culture de tranches.
Maintenez la tranche dans des conditions physiologiques. La culture en tranches est prête pour les essais en aval.
Commencez par utiliser une pince stérile pour placer des inserts de culture en PTFE vides dans chaque puits d’une plaque à six puits contenant 1 millilitre de milieu de culture en tranches par puits. Lorsque tous les inserts ont été ajoutés, placez la plaque dans un incubateur de culture de tissus humidifié à 37 degrés Celsius et 5 % de CO2.
Ensuite, placez les morceaux de tissu tumoral dans une boîte de Pétri contenant un milieu de traitement glacé et utilisez une pipette pour laver doucement le tissu trois fois avec un produit frais afin d’éliminer tous les globules rouges adhérents. Après le troisième lavage, utilisez un scalpel pour couper les morceaux de tumeur en bandes d’environ 3 x 3 x 10 millimètres, en retirant soigneusement tous les vaisseaux attachés et en évitant les tissus nécrotiques ou cautérisés.
Lorsque tous les tissus ont été coupés, ajoutez 5 à 7 millilitres d’agarose liquide à 37 degrés Celsius dans un moule d’enrobage en plastique de 2 centimètres cubes, et refroidissez l’agarose sur un lit de glace pendant une minute. Placez 2 à 4 bandes de tissu dans l’agarose, avec le grand axe orienté verticalement, en laissant les tissus sur la glace pendant encore 2 à 5 minutes après leur mise en place.
Lorsque l’agarose s’est solidifiée, coupez les côtés de la forme avec un scalpel pour retirer délicatement l’agarose du moule, et utilisez une généreuse goutte de colle cyanoacrylate pour fixer le bloc d’agarose à une plaque d’échantillon de vibratome.
Lorsque la colle a pris, immergez le bloc d’agarose dans un milieu de traitement glacé et utilisez une pipette en plastique stérile et taillée pour faire bouillonner un mélange de 5 % de CO2 et 95 % d’O2 dans le milieu à l’intérieur du réservoir de vibratome. Réglez l’épaisseur de la tranche du vibratome sur 300 à 350 microns et ajustez la vitesse avancée de la lame et l’amplitude de la lame en fonction de la consistance du tissu et des spécifications du vibratome.
Obtenir le nombre approprié de coupes en fonction de l’analyse expérimentale prévue. À l’aide d’une micro-spatule en acier inoxydable, transférer les tranches dans une boîte de Pétri contenant un fluide de traitement glacé au fur et à mesure de leur acquisition. Lorsque toutes les tranches ont été acquises, utilisez la micro-spatule pour transférer chaque tranche sur un seul insert en PTFE.
Après une incubation de 12 à 24 heures, équilibrez une nouvelle plaque à six puits contenant du milieu de culture de tranches fraîches dans l’incubateur de culture cellulaire pendant 15 minutes. Ensuite, à l’aide d’une pince stérile, saisissez chaque insert par le rebord et transférez les inserts dans des puits individuels de la nouvelle plaque à six puits.