Analyse de la survie des cellules de Purkinje dans des cultures de coupes cérébelleuses organotypiques

Commencez avec un cerveau de chiot de souris.

Isolez le cervelet et obtenez des coupes de tissu d’épaisseur appropriée.

Transférez les tranches sur des inserts membranaires placés dans des puits de plaque de culture contenant le milieu.

Dans les puits traités, le média contient un composé d’essai neuroprotecteur. Les puits de contrôle n’ont pas le composé. Couver.

Dans des conditions de contrôle, les cellules cérébelleuses de Purkinje subissent une apoptose, imitant le développement postnatal précoce in vivo.

Dans les puits traités, en fonction de son potentiel, le composé peut protéger les cellules de l’apoptose.

Lavez les tranches et fixez-les pour préserver l’intégrité cellulaire.

Transférez les tranches dans une solution de blocage de la perméabilisation pour perméabiliser les membranes cellulaires et bloquer les sites de liaison non spécifiques.

Superposition avec des anticorps primaires ciblant une protéine de liaison au calcium spécifiquement exprimée dans les cellules de Purkinje.

Laver et introduire des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores ciblant les anticorps primaires.

Contre-colorez les noyaux avec un colorant de liaison à l’ADN et montez les tranches.

À l’