JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:16 min • July 8th, 2025
Commencez avec une plaque de culture recouverte d’un polymère synthétique et d’une protéine d’adhésion.
Ajoutez des cellules progénitrices neurales de la moelle épinière remises en suspension dans un milieu de différenciation des motoneurones, complétées par un inhibiteur à petites molécules.
La surface de la plaque revêtue facilite l’adhérence des cellules.
L’inhibiteur à petite molécule bloque des protéines kinases spécifiques, empêchant ainsi l’apoptose cellulaire.
Retirez le milieu épuisé et ajoutez un nouveau milieu de différenciation.
Le milieu contient un composé qui favorise la différenciation des progéniteurs neuronaux en progéniteurs des motoneurones.
De plus, des progéniteurs gliaux engagés apparaissent.
Ensuite, remplacez par un milieu de différenciation complété par un inhibiteur de synthèse de l’ADN.
Ces inhibiteurs induisent sélectivement des dommages à l’ADN et la mort chez les progéniteurs gliaux, tandis que les progéniteurs des motoneurones se différencient en neurones matures.
Laver les cellules avec un tampon et ajouter le milieu de différenciation sans inhibiteurs pour maintenir les neurones.
Pendant la culture, remplacez régulièrement le milieu pour reconstituer les nutriments.
De plus, remplacez le milieu par un milieu complété par une protéine d’adhésion pour améliorer l’attachement neuronal, établissant ainsi une culture homogène de motoneurones.
Si les cultures de cellules progénitrices neurales ont été congelées, décongelez-les. Après l’échange de milieu et le rinçage PBS comme décrit dans le manuscrit, changez le milieu avec un milieu de différenciation des motoneurones contenant 0,02 micromolaire de cytosine arabinoside.
Ensuite, incubez les cellules pendant 48 heures à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone lorsque les progéniteurs engagés dans les cellules gliales émergent sous forme de cellules plates proliférantes uniques sous des progéniteurs de motoneurones post-mitotiques agrégés en grappes de cellules. Plus tard, effectuez l’échange de support comme indiqué dans le manuscrit.