Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:34 min • July 8th, 2025
Prenez le chiot souris cerebella.
Homogénéisez-les en fragments plus petits.
Ajoutez une enzyme protéolytique pour digérer la matrice extracellulaire du tissu, en desserrant les progéniteurs granulaires cérébelleux, ou CGNP, et les astrocytes.
Ajouter un milieu de culture CGNP contenant du sérum pour arrêter l’activité enzymatique. Centrifugez et jetez le surnageant riche en enzymes.
Remettre en suspension les fragments de tissu dans le milieu CGNP. Dissocier mécaniquement le tissu pour libérer les cellules.
Une fois que les débris se déposent, transférez le surnageant contenant les cellules dans un tube frais.
Centrifugez et retirez le surnageant avec les débris.
Remettez les cellules en suspension dans un milieu CGNP et ensemencez-les sur des puits à plaques multipuits recouverts de poly-D-lysine. Couver.
Les astrocytes se déposent et adhèrent fortement au revêtement de poly-D-lysine, par rapport aux CGNP.
Secouez la plaque et récupérez le surnageant contenant les CGNP. Centrifugez et retirez le surnageant.
Remettre en suspension les CGNP dans un milieu CGNP et les semer sur une plaque multipuits recouverte de poly-L-ornithine. Couver.
Les CGNP se fixent à la surface revêtue et p
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