Génération de sphéroïdes à partir de cellules souches pluripotentes humaines

Commencez par des colonies de cellules souches pluripotentes humaines ou hPSC attachées à un substrat approprié dans un milieu de culture.

Retirez le fluide. Ajoutez un milieu neuronal contenant des inhibiteurs spécifiques et incubez.

Ces inhibiteurs dirigent la maturation des hPSC vers une lignée neuronale, formant des colonies neuroectodermiques. Ce sont des précurseurs de petites structures sphériques appelées sphéroïdes.

Retirez le milieu et lavez-le avec un tampon à sel.

Incuber avec une enzyme digestive pour détacher les colonies de la plaque.

Ajouter le milieu neuronal pour arrêter l’activité enzymatique.

Récupérez les colonies et transférez-les dans un tube.

Laissez-les se déposer, puis jetez le surnageant.

Remettre les colonies en suspension dans un milieu neuronal contenant un facteur de croissance.

Transférez les colonies dans une plaque multi-puits et incuberez.

Ce facteur de croissance facilite l’auto-organisation et la multiplication des cellules neuroectodermiques, les amenant à former un sphéroïde.

Pour commencer, plaquez les colonies de hPSC sur une matrice de membrane basale qualifiée hESC à partir d’un puits d’une plaque de 6 puits à 60 % de confluence dans trois