Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commencez par des cellules souches embryonnaires cultivées sur une couche de cellules nourricières de fibroblastes, qui maintiennent les cellules souches dans leur état indifférencié.
Ajoutez des enzymes trypsine et de l’EDTA pour perturber l’adhésion de cellule à cellule et détacher les cellules.
Plus tard, ajoutez un milieu de culture enrichi en sérum pour arrêter l’activité enzymatique et transférez la suspension cellulaire dans un tube.
Centrifuger pour collecter les cellules, retirer le surnageant, puis remettre les cellules en suspension dans un milieu contenant de l’acide rétinoïque.
Placez des gouttelettes de cette suspension cellulaire sur la base d’une boîte de culture non adhésive.
Retournez la base pour former des gouttes suspendues et positionnez-la sur le couvercle du plat de culture rempli d’un tampon pour éviter que les gouttelettes ne sèchent.
Dans les gouttes suspendues, la gravité fait que les cellules se déposent au fond, finissant par s’agréger en structures tridimensionnelles appelées corps embryoïdes.
De plus, les cellules absorbent l’acide rétinoïque, qui module diverses voies de signalisation intracellulaires.
Cette modulation stimule la différenciation des
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