Un test de myélinisation induite par transduction in vitro pour des cellules précurseurs d’oligodendrocytes

Prenez des cultures adhérentes de cellules précurseurs primaires d’oligodendrocytes, ou OPC, dans un milieu de croissance.

Ajoutez des vecteurs lentiviraux de contrôle dans le puits de contrôle et des vecteurs de test, codant pour des protéines de signalisation qui régulent la myélinisation, dans le puits de test, puis incuberez.

Les cellules internalisent les vecteurs, et l’ARN viral est transcrit en ADN et incorporé dans le génome de l’hôte, exprimant les protéines de signalisation dans les cellules testées.

Introduire des enzymes pour détacher les OPC du substrat.

Neutralisez les enzymes et centrifugez pour éliminer les enzymes.

Ajoutez le milieu de croissance et transférez les OPC sur des lamelles à l’intérieur d’une microplaque avec des neurones ganglionnaires de la racine dorsale ou DRG collés. Permettez aux OPC de s’installer.

Remplissez les puits avec le milieu de culture et incuberez. L’interaction avec les neurones DRG déclenche la maturation des OPC en oligodendrocytes.

Les protéines de signalisation exprimées incitent les oligodendrocytes à former des gaines de myéline autour des neurones DRG.

Évaluer la formation de la gaine de myéline induite par les protéines de sign