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Prenez une boîte de Pétri recouverte de polymère.
Ajoutez la lignée des oligodendrocytes ou cellules OL à un milieu de culture approprié et incuberez.
La charge positive sur le revêtement polymère attire la membrane cellulaire chargée négativement, améliorant ainsi l’attachement des cellules à la boîte. Les facteurs de croissance et les nutriments contenus dans le milieu facilitent l’expansion cellulaire.
Remplacez le milieu par un milieu pauvre en nutriments et incubez.
De faibles niveaux de nutriments induisent un léger stress dans les cellules, les amenant à sécréter des protéines, des lipides et d’autres molécules, y compris des facteurs de croissance et des cytokines, dans l’espace extracellulaire.
Recueillir le milieu dans un tube.
Filtre : stérilisez le milieu pour éliminer les débris cellulaires et les composants insolubles.
Le filtrat contenant les molécules bioactives solubles sécrétées par les cellules OL est appelé milieu conditionné aux oligodendrocytes ou OCM.
Stockez l’OCM à des températures plus basses jusqu’à ce qu’il soit utilisé pour éviter la dégradation des protéines et d’autres molécules, préservant ainsi l’efficacité de l’OCM.
Plaquez deux ou trois boîtes de Pétri pré-enduites de 100 millimètres avec 10 millilitres de suspension cellulaire.
Incuber dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius sous 5 % de dioxyde de carbone.
Dans une hotte à flux laminaire dans des conditions stériles, renouveler le milieu de culture avec 10 millilitres de milieu chaud Mbb 27 faible.
Incuber pendant 2 jours dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius sous 5 % de dioxyde de carbone.
Pour récolter l’OCM, prélever le surnageant contenant les facteurs sécrétés par les oligodendrocytes. Stérilisez l’OCM à l’aide d’un filtre de 0,22 micron.