Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:34 min • July 8th, 2025
Prenez un embryon de poussin soutenu dans un cadre en papier filtre et placez-le sous un microscope à dissection.
Retirez la membrane vitelline, un revêtement protecteur entourant l’embryon.
Identifiez les plis neuraux du mésencéphale situés à l’arrière des lobes optiques et en avant du croissant cardiaque, le précurseur embryonnaire du cœur mature.
Les plis neuraux contiennent des cellules de crête neurale prémigratoires, qui sont des cellules souches multipotentes qui se transforment en cellules migratrices au cours du développement.
Ces cellules migratrices se différencient en cellules neuronales et non neuronales.
Exciser la face la plus dorsale des plis neuraux et transférer le tissu dans une boîte de culture contenant un tampon.
Ensuite, placez des lamelles recouvertes d’une protéine d’adhésion dans des puits de plaque de culture contenant du milieu.
Transférez les plis neuraux sur les lamelles enrobées. Incuber pour faciliter l’attachement des tissus.
Au cours de la culture, les cellules migratrices de la crête neurale émergent des plis neuraux sur la surface revêtue, établissant une culture cellulaire de la crête neurale.
Transférez un embryon dans une boîte propre contenant la solution Pen-Strep de Ringer. Agitez doucement l’embryon d’avant en arrière pour éliminer tout jaune qui obscurcit la vue, et remplacez la solution Pen-Strep de Ringer ou transférez-la dans un plat frais s’il devient trouble. Positionnez l’embryon dorsal et le cadre vers le haut sous un microscope à dissection. Laissez l’embryon sur le cadre en papier pour le maintenir étiré et maintenu en place.
Ensuite, retirez la membrane vitelline à l’aide d’une pince pour exposer les plis neuraux. Inclure le tissu caudal aux vésicules optiques en expansion et rostral au cerveau postérieur, où les constrictions rhombomères commencent tout juste à apparaître. À l’aide de ciseaux à ressort, excisez soigneusement les plis neuraux du mésencéphale. Prenez soin d’exciser la face dorsale du pli neural avec une contamination minimale du tube neural et de l’ectoderme non neural, et transférez les plis neuraux dans une boîte propre contenant la solution Pen-Strep de Ringer à l’aide d’une pipette P20 ou d’une pipette Pasteur en verre stérile rincée avec la solution Pen-Strep de Ringer.
Rangez les plis collectés sur de la glace pendant que vous disséquez des plis supplémentaires. Après avoir retiré la boîte de culture de l’incubateur, utilisez une pipette ou une pipette Pasteur pour retirer la solution de fibronectine de la boîte ou du puits de lamelles. Après avoir rincé le substrat enrobé de fibronectine avec la solution Pen-Strep de Ringer, ajoutez un volume approprié de milieu de culture complet dans la boîte ou le puits.
Pour bloquer le plastique et empêcher le tissu de coller, utilisez une pipette P20 ou P200 et rincez la pointe de la pipette avec la solution Pen-Strep de Ringer. Ensuite, transférez les plis neuraux isolés vers le centre de la lamelle enrobée de fibronectine, en prenant soin de transférer le moins possible la solution Pen-Strep de Ringer. Après avoir laissé les explants se déposer pendant 10 à 15 minutes, placez-les dans une chambre humidifiée à 38 degrés Celsius en portant lentement et soigneusement la boîte de culture avec des plis neuraux plaqués.