Isolement et culture de cellules précurseurs d’oligodendrocytes à partir du cortex cérébral d’un chiot de souris

Prenez le cortex d’un chiot de souris.

Ajoutez une enzyme protéolytique qui digère la matrice extracellulaire du tissu. Ensuite, dissociez mécaniquement le tissu, en relâchant les cellules.

Ajoutez du milieu glial et de la DNase pour dégrader tout ADN contaminant.

Dissocier mécaniquement le tissu pour libérer les neurones et les cellules gliales.

Une fois que le tissu non digéré s’est déposé, prélevez le milieu contenant les cellules et centrifugez. Retirez le surnageant.

Remettre les cellules en suspension dans un milieu glial et les déposer sur une fiole recouverte de protéines de matrice extracellulaire.

couver. Les astrocytes adhèrent plus fortement à la surface recouverte que les autres cellules. Les milieux gliaux ne favorisent que la survie des cellules gliales.

Remplacez le support pour enlever les débris.

Incuber en secouant pour détacher les cellules précurseurs d’oligodendrocytes sus-jacentes, les OPC et la microglie.

Transférez le milieu avec les cellules sur une plaque de culture.

Incuber en secouant pour faciliter l’adhésion microgliale différentielle.

Transvasez le surnageant OPC non adhérent sur une plaque multipuits recouverte de poly-D-lysine. Incuber pour l’adhés