Manipulation de cultures de cellules souches neuronales dans une installation de production cellulaire

Pour minimiser la contamination dans les cultures de cellules souches neuronales, utilisez une installation dotée d’un capuchon laminaire, d’une chambre tampon, d’une chambre de traitement et d’une chambre de microscope, chacune séparée par des portes étanches à l’air.

Maintenant, remplissez d’eau dans une plaque de culture dans l’incubateur pour maintenir l’humidité.

Ajustez les paramètres de la chambre tampon, de la chambre de traitement et de l’incubateur à des niveaux optimaux.

Nettoyez toutes les surfaces avec un désinfectant et une gaze stérile pour éliminer les contaminants microbiens.

Placez d’abord la plaque de culture de cellules souches neuronales dans le capuchon laminaire qui fournit de l’air filtré.

Essuyez l’extérieur de la plaque avec de la gaze imbibée d’éthanol, puis transférez-la dans la chambre tampon qui fournit de l’air filtré avec des niveaux de gaz optimaux.

Enfin, déplacez la plaque à travers la chambre de traitement dans l’incubateur et fermez la porte.

Après l’incubation, remettez la plaque de culture dans la chambre de traitement avec un milieu frais.

Équilibrez le milieu frais.

Rafraîchir le milieu dans la plaque de culture et réincuber la plaque.

Placez trois boîtes de Pétri dans le bac à eau à la base de chaque incubateur. Remplissez ces plats avec de l’eau stérile et maintenez le niveau d’eau dans ces plats car ils sont essentiels pour maintenir le point de consigne d’humidité relative dans l’incubateur.

Dans l’interface graphique, cliquez sur Incubateur. Ensuite, cliquez sur la valeur existante de l’humidité relative sous le point de consigne et entrez 85 %. Ensuite, cliquez sur la coche verte pour accepter cette valeur.

Ensuite, ajustez les chambres tampons, la chambre de traitement et un incubateur aux points de consigne de gaz requis pour le type de cellules introduites. Nettoyez la surface de la chambre de traitement avec de la gaze stérile et un désinfectant ininflammable, tel que des produits à base de chlorure de benzalkonium.

Ensuite, nettoyez les gants et les surfaces fréquemment touchées, comme les poignées de porte. Ensuite, nettoyez la surface de la hotte à flux laminaire et de la chambre tampon avec de l’éthanol à 70 % et laissez-la sécher.

Après cela, placez le flacon ou la plaque de cellules dans la hotte et essuyez brièvement sa surface extérieure avec une éponge de gaze stérile saturée d’éthanol. Ensuite, placez le ballon ou la plaque dans la chambre tampon et analysez un facteur de dilution. Une fois l’opération terminée, transférez immédiatement le ballon ou la plaque dans l’incubateur approprié.

Comme l’incubateur se trouve à l’arrière de la chambre de traitement, tirez une étagère dans la chambre de traitement pour le placement des cellules et évitez d’ouvrir les portes de l’incubateur inutilement ou pendant de longues périodes.

Dans cette étape, préparez le milieu de culture cellulaire. Laissez le fluide s’équilibrer avec les niveaux de dioxyde de carbone et d’oxygène présents dans le système en laissant le récipient du fluide légèrement débouché pendant 20 minutes.

Ensuite, retirez l’ancien milieu des puits. Pour les cellules souches pluripotentes, retirez presque tout l’ancien milieu avec une petite quantité de l’ancien milieu restant, afin d’éviter la dessiccation pendant le processus d’alimentation. Pour les cellules souches neurales, retirez la moitié de l’ancien milieu. Ensuite, ajoutez du milieu frais dans les plaques de culture cellulaire et replacez les plaques dans leur incubateur désigné.