Purification de cellules précurseurs endothéliales CD31+ à l’aide du tri cellulaire activé par magnétisme
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:32 min • July 8th, 2025
Prenez une culture adhérente de cellules progénitrices endothéliales ou EPC, précurseurs des cellules endothéliales microvasculaires cérébrales.
La culture, obtenue en différenciant des cellules souches pluripotentes, comprend des EPC positifs pour le marqueur de surface CD31 et contaminant des cellules CD31 négatives.
Incuber avec un réactif de dissociation pour détacher les cellules et filtrer pour obtenir une suspension unicellulaire.
Ajoutez un milieu pour neutraliser les enzymes, centrifugez pour éliminer le surnageant et remettez les cellules en suspension dans un tampon.
Incuber avec un réactif bloquant pour inhiber les récepteurs cellulaires Fc, empêchant ainsi le marquage non spécifique.
Ajoutez un anticorps conjugué au fluorophore spécifique de CD31 et incubez pour marquer les EPC.
Centrifugez et jetez les anticorps non liés. Incuber avec des complexes d’anticorps contenant un anticorps qui se lie aux fluorophores.
Introduisez des nanoparticules magnétiques enrobées de polymère et incuberez, permettant aux nanoparticules de se lier au deuxième anticorps des complexes.
À l’aide d’un champ magnétique, isolez les cellules liées aux nanoparticules.
Jetez la suspension contena
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