Différenciation des cellules souches neurales humaines en progéniteurs neuraux et astrocytaires
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commençons par les neurosphères non adhérentes, un agrégat tridimensionnel de cellules souches neurales humaines dans un milieu conditionné dérivé d’une culture cellulaire.
Ce milieu contient des nutriments, des facteurs de croissance et des composants de la matrice extracellulaire qui maintiennent la viabilité cellulaire.
Centrifugeuse pour collecter les neurosphères.
Traitez-les avec des enzymes trypsine et DNase, mélangez le contenu, puis incuberez.
La trypsine perturbe l’adhésion de cellule à cellule et facilite le détachement cellulaire, tandis que la DNase dégrade l’ADN libre pour empêcher l’agglutination des cellules.
Pipetez le contenu à plusieurs reprises pour former une suspension unicellulaire. Ensuite, ajoutez un inhibiteur de la trypsine pour neutraliser l’activité enzymatique.
Centrifugez et retirez le surnageant, puis remettez les cellules en suspension dans un milieu de prolifération contenant des facteurs de croissance neurale.
Ensemencez la suspension cellulaire sur une lamelle recouverte de polymère placée dans une plaque multipuits. Incuber pour permettre la fixation des cellules souches au polymère.
De plus, sur la base de l’absorption de facteurs de croissance
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