Génération d’organoïdes cérébraux de type cerveau antérieur à partir de cellules souches pluripotentes induites par l’homme

Commencez avec une plaque à puits à faible adhérence contenant des cellules souches pluripotentes ou iPSC d’origine humaine dans un milieu de cellules souches complété par un inhibiteur de la Rho-kinase.

Les inhibiteurs pénètrent dans les cellules, bloquent les enzymes Rho-kinase et maintiennent la viabilité cellulaire. Cela favorise la formation d’agrégats iPSC.

Remplacez le milieu par un milieu de cellules souches pour permettre aux agrégats de se développer. Transférez-les dans un plat de culture à faible attachement avec un milieu d’induction corticale.

Les composants de ce milieu provoquent la différenciation des iPSC en cellules neuroectodermiques, un précurseur neural.

Transférez chaque agrégat neuroectodermique sur un film avec des puits peu profonds.

Remplacer le milieu par une matrice à membrane basale et incuber pour permettre la solidification de la matrice et le piégeage des agrégats.

Transférez ces agrégats incorporés dans une matrice dans une boîte contenant un milieu d’induction corticale et incubez avec agitation.

Au fil du temps, les cellules neuroectodermiques utilisent les facteurs de différenciation et se transforment en cellules neuroépithéliales.

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