Formation et expansion des neurosphères à partir d’un tissu hippocampique

Commençons par un gyrus denté d’hippocampe de souris postnatal, un tissu cérébral riche en cellules souches neurales et progénitrices avec une capacité d’auto-renouvellement.

Ajoutez des enzymes trypsine qui dissocient la matrice extracellulaire du tissu, relâchant les cellules.

Ensuite, retirez les enzymes et lavez le tissu à plusieurs reprises avec un tampon.

Remplacez le tampon par un milieu de culture de neurones enrichi en facteurs de croissance.

Pipeter à plusieurs reprises pour dissocier le tissu et libérer les cellules dans le milieu.

Ensemencez la suspension cellulaire diluée dans une boîte de Pétri non enrobée et incuber.

Les cellules souches et progénitrices utilisent des nutriments et des facteurs de croissance pour proliférer.

Au fil du temps, ils s’agrègent spontanément, formant des structures tridimensionnelles flottantes appelées neurosphères primaires avec une population cellulaire hétérogène.

Collectez ces neurosphères et jetez le surnageant. Remettez les neurosphères en suspension dans un milieu de culture de neurones et dissociez-les en une suspension unicellulaire.

Recultivez ces cellules dans une boîte de Pétri non enrobée pour former des neurosphères secondai