Génération de cellules endothéliales cérébrales à partir de cellules souches pluripotentes induites

Prenez une culture de cellules souches pluripotentes induites, ou iPSC, dans un milieu d’entretien contenant des inhibiteurs de la rho-kinase.

Les facteurs de croissance maintiennent les cellules indifférenciées, tandis que les inhibiteurs de la rho-kinase améliorent la survie cellulaire.

Remplacez le milieu par un milieu d’entretien frais, en éliminant les inhibiteurs de la rho-kinase. Incuber, favorisant la formation de colonies.

Remplacer régulièrement par des milieux non conditionnés, qui fournissent un environnement contrôlé, déclenchant la différenciation des iPSC en progéniteurs neuraux, puis en cellules endothéliales cérébrales, suivie d’une prolifération cellulaire.

Remplacer par des milieux cellulaires endothéliales contenant de l’acide rétinoïque et des facteurs de croissance des fibroblastes. Couver.

Les facteurs de croissance des fibroblastes facilitent la prolifération cellulaire, tandis que l’acide rétinoïque favorise la maturation des cellules endothéliales cérébrales.

Ajoutez des enzymes protéolytiques pour détacher les cellules. Récupérez les cellules et centrifugez. Jetez le surnageant.

Remettez les cellules en suspension dans un milieu endothélial et ensemencez-