Préparation de tranches colliculo-thalamocorticales à partir du cerveau d’un bébé souris

Placez le cerveau d’un bébé souris sur une diapositive avec sa face dorsale vers le haut.

Coupez l’avant du cerveau et repositionnez-le sur la surface plane créée.

Alignez la surface dorsale et la ligne médiane du cerveau sur la lame. Coupez à un angle pour aligner les structures auditives connectées du mésencéphale et du cerveau antérieur. Ces structures sont le colliculus inférieur ou CI, le corps géniculé médial ou MGB, le noyau réticulaire thalamique ou TRN et le cortex auditif ou AC.

Fixez la surface du cerveau coupée angulairement sur une platine d’échantillon de vibratome avec des blocs de gélose, en vous assurant que le cerveau postérieur est calé sur le bloc le plus mince.

Transférez la platine dans le vibratome et ajoutez un tampon pour éviter d’endommager les tissus.

Commencez à trancher pour localiser l’IC, le MGB, le TRN et le CA.

Récupérez la tranche contenant les régions connectées, appelée coupe colliculo-thalamocorticale, et transférez la tranche dans une chambre de maintien pour préserver la viabilité des tissus.

Pour préparer l’étape de coupe pour le tranchage, coupez un petit morceau de gélose à 3 % d’environ 1 centimètre cube à utiliser comme butée pour le cerveau, et un autre morceau de 1,5 centimètre sur 1,5 millimètre sur 3 millimètres à utiliser comme bosse pour soutenir le colliculus inférieur.

Ensuite, collez la butée arrière sur la scène avec un adhésif cyanoacrylate, puis collez la bosse sur le côté droit de la butée de sorte qu’elles forment un angle de 80 degrés. Sur une diapositive marquée de deux lignes à 90 degrés et d’une ligne diagonale à 17 degrés du haut à gauche vers le bas à droite, placez le côté dorsal du cerveau vers le haut au point d’intersection des deux lignes.

À l’aide d’une lame de rasoir, retirez 2 à 4 millimètres de l’extrémité rostrale du cerveau pour créer une surface plane. Ensuite, placez le côté caudal du cerveau vers le haut sur la surface plane nouvellement créée. Alignez la surface dorsale du cerveau avec une ligne horizontale et la ligne médiane du cerveau avec une ligne verticale marquée sur la lame. Ensuite, alignez la lame du rasoir avec une ligne de 17 degrés. Inclinez le rasoir à un angle de 30 degrés et retirez environ 3 millimètres du cortex droit dans une double coupe diagonale.

Pour monter le cerveau sur la platine du vibratome, placez un petit morceau de papier filtre sur la face ventrale du cerveau de sorte que la dimension longue soit perpendiculaire à la ligne médiane. Appliquez soigneusement une petite quantité d’adhésif cyanoacrylate sur la zone située devant la butée arrière et à gauche de la bosse. Par la suite, placez le côté cérébral coupé en diagonale double sur la colle de sorte que la partie caudale du cerveau et le cerveau postérieur soient calés sur la bosse et que le côté droit du cerveau soit contre le filet arrière.

Dans cette procédure, placez rapidement l’étape de coupe dans le vibratome. Remplissez la scène avec la solution de coupe. Ensuite, alignez la lame avec le haut du cerveau. Retirez 1 à 1,5 millimètre du haut du cerveau. Ensuite, coupez et retirez d’autres tranches de 300 à 500 micromètres tout en vous déplaçant plus profondément.

Lorsque le colliculus inférieur, le corps géniculé médial et le noyau géniculé latéral sont tous visibles, le gyrus denté doit apparaître en forme de C et la structure doit être alignée. Obtenez environ deux tranches de 600 micromètres. Il s’agit des tranches colliculothalamocorticales. Après cela, transférez-les dans la chambre de conservation à 32 degrés Celsius.