Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commencez par des iPSC humaines modifiées contenant un gène inductible à la doxycycline codant pour la différenciation des myoblastes ou à la protéine MYOD dans un milieu de cellules souches contenant des inhibiteurs de la rho-kinase.
Transférez les cellules sur des plaques revêtues d’ECM et incubez pour favoriser la fixation des cellules.
Pendant ce temps, l’inhibiteur inactive les enzymes Rho-kinases intracellulaires, améliorant ainsi la viabilité cellulaire.
Remplacez le milieu par un milieu de cellules souches contenant de la doxycycline.
La doxycycline pénètre dans les cellules et se lie aux protéines activatrices. Ces complexes se lient au promoteur, induisant l’expression génique dans certaines cellules et produisant des protéines MYOD, qui déclenchent la différenciation des cellules souches en cellules musculaires.
Traitez les cellules avec un milieu de différenciation myogénique contenant des facteurs de différenciation myogénique pour favoriser la formation de myotubes, une cellule musculaire multinucléée.
Plus tard, introduisez un milieu d’induction neuronale avec des facteurs de croissance neuronale.
Ces facteurs différencient les iPSC restantes en motoneurones et en ce
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