Obtention d’une suspension unicellulaire à partir de tissu hippocampique de souris
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:42 min • July 8th, 2025
Prenez des fragments d’hippocampe de souris adultes perfusés dans un tube de dissociation contenant de la papaïne et de la DNase.
Placez le tube sur un dissociateur mécanique.
Le dissociateur désintègre mécaniquement les tissus, relâchant les cellules, y compris les neurones et les cellules gliales.
La papaïne décompose la matrice extracellulaire du tissu, libérant des cellules. La DNase dégrade l’ADN contaminant.
Ajouter un tampon contenant de la BSA, inactivant les enzymes.
Passez la suspension dans une crépine pour enlever les gros débris.
Centrifuger le filtrat. Jetez le surnageant riche en enzymes.
Remettez les cellules en suspension dans le tampon et transférez-les dans un tube frais.
Ajoutez un média à gradient de densité, mélangez et superposez le mélange avec un tampon.
Lors de la centrifugation, les cellules et les débris forment des couches distinctes en fonction de leur densité.
Retirez la couche tampon supérieure et la couche intermédiaire de débris.
Ajoutez du tampon à la couche inférieure contenant les cellules et mélangez. Centrifuger et jeter le surnageant contenant le milieu à gradient de densité.
Remettre en suspension les cellules de l’hippocampe dans un tampon
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