Analyse de la réactivation des cellules souches neurales dans des explants de cerveau de drosophile en culture

En réponse à des stimuli externes, les cellules souches neurales du cerveau de la drosophile, ou NSC, sortent de la quiescence, un état d’arrêt du cycle cellulaire, et se réactivent pour commencer à proliférer.

Prenez des larves de drosophile fraîchement écloses, un stade où les NSC sortent naturellement de la quiescence in vivo.

Saisissez les crochets buccaux et le corps pour fendre la larve.

Localisez le cerveau derrière les crochets buccaux et excisez-le.

Transférez les cerveaux dans des puits de plaque de culture contenant des milieux.

Dans les puits traités, le milieu contient une hormone de test, tandis que les puits témoins n’en contiennent pas. Couver.

Dans des conditions de contrôle, les CSN restent au repos en raison de l’absence de stimuli externes.

Dans les puits traités, l’hormone se lie à des récepteurs spécifiques des NSC, activant les voies de signalisation en aval et réactivant les NSC.

Les CSN réactivées entrent dans le cycle cellulaire et subissent une prolifération.

Après l’incubation, les cerveaux sont maintenant prêts pour l’analyse en aval afin de visualiser la prolifération des NSC, confirmant ainsi le potentiel de réactivation de l’hormone.

Disséquez la cervelle des larves placées dans la deuxième boîte de montre en verre avec SSM, à l’aide d’une pince sous un microscope de dissection et en ajustant le grossissement au besoin. Utilisez une pince pour saisir les crochets buccaux, et avec l’autre, saisissez doucement le corps à mi-chemin et tirez dans la direction opposée pour diviser la larve en deux morceaux. Après avoir disséqué 15 à 20 cerveaux, ajoutez 1 millilitre de SSM dans un puits d’un plateau de culture stérile à 24 puits. À l’aide d’une micropipette et d’une pointe stérile, transférez les cerveaux fraîchement disséqués dans le SSM, puis incubez le milieu avec les cerveaux pendant 24 heures à 25 degrés Celsius.