Isolement d’oligodendrocytes primaires murins à l’aide de billes immunomagnétiques

Prenez une suspension de cellules neurales, y compris des oligodendrocytes immatures et des cellules neuronales primaires, d’un chiot de souris.

Remettez les cellules en suspension dans un tampon de tri magnétique pour éviter l’agglutination des cellules.

Ajoutez des microbilles magnétiques modifiées portant des anticorps anti-O4 à leur surface. Agitez la solution pour assurer un mélange uniforme.

Incuber pour permettre aux microbilles de se lier au galactolipide sulfaté, un antigène O4 sur les oligodendrocytes, tandis que les autres cellules restent non liées ou faiblement liées.

Lavez le mélange avec un tampon de tri cellulaire supplémentaire.

Centrifugez et jetez le surnageant, puis remettez les cellules en suspension.

Ensuite, passez les cellules liées par des billes dans une colonne de séparation magnétique équipée d’un filtre qui élimine les plus gros amas de cellules.

Pendant le fonctionnement, sous un champ magnétique, les complexes liés par des billes se déplacent vers l’aimant, se fixant sur les côtés.

Laver pour enlever les cellules non liées et faiblement liées.

Récupérez la colonne du séparateur et lavez-la avec un milieu de prolifération pour collecter les oligodendrocytes primaires pour de futures applications.

Après le comptage, centrifugez à nouveau les cellules et remettez la pastille en suspension dans 90 microlitres de tampon de tri de cellules magnétiques fraîches pour 1 x 10⁷ cellules. Ensuite, ajoutez 10 microlitres de billes anti-O4 par 1 x 10⁷ cellules et mélangez la solution cellulaire en effleurant doucement. Après 15 minutes à 4 degrés Celsius, en effleurant doucement, toutes les 5 minutes, ajoutez doucement 2 millilitres de tampon de tri cellulaire magnétique pour 1 x 10⁷ cellules pour un lavage par centrifugation, et jetez le surnageant par aspiration sous vide soigneuse.

Remettez la pastille en suspension dans 500 microlitres de tampon de tri magnétique frais pour 1 x 10⁷ cellules et placez une colonne de tri de billes magnétiques de taille appropriée dans son séparateur magnétique correspondant. Placez une passoire de 40 microns sur la colonne et pré-rincez la crépine avec 3 millilitres de tampon de tri cellulaire magnétique, en laissant le tampon traverser la colonne sans laisser la colonne sécher. Ajoutez les cellules dans la passoire, puis effectuez un lavage de 1 millilitre avec un tampon de tri cellulaire magnétique.

Laver la colonne trois fois avec 3 millilitres de tampon de tri cellulaire magnétique par lavage, et une fois avec un milieu de prolifération d’oligodendrocytes. Ensuite, transférez la colonne dans un tube de 15 millilitres et utilisez le piston pour rincer immédiatement 5 millilitres de milieu de prolifération d’oligodendrocytes frais à travers la colonne.