Marquage de marqueurs de surface de cellules neurales avec de l’azidosucre lors de la co-culture avec des cellules endothéliales

Commencez par ajouter une suspension de cellules endothéliales de cerveau de souris à l’insert de membrane perméable d’une plaque transwell.

Ajoutez un milieu de culture au fond et incuber.

Les facteurs de croissance et les nutriments contenus dans le milieu aident les cellules à se développer en tant que monocouche.

Retirez le milieu du puits du fond et de l’insert.

Lavez les surfaces intérieures et extérieures de l’insert pour enlever tous les débris.

Ajoutez un milieu adhérent à l’insert et transférez l’insert dans un puits recouvert d’une matrice contenant des cellules souches neurales et progénitrices corticales primaires, ou NSPC, et incuber.

Ajoutez du sucre azido, un analogue non naturel du précurseur de l’acide sialique, aux cellules endothéliales et aux NSPC, et incubez.

Les cytokines et les chimiokines sécrétées par les cellules endothéliales favorisent la croissance des NSPC en grands clones en forme de feuille.

Les azidosucres s’intègrent dans les structures sialoglycanes à la surface de la cellule NSPC, marquant la glycoprotéine. Cela permet d’identifier les protéines de surface cellulaire sur les NSPC expansées.

Pour préparer les cellules endothéliales, mettez en sus