Préparation de tubes endothéliales cérébraux à partir d’artérioles parenchymateuses de souris

Fixez un cerveau de souris, face ventrale vers le haut, dans une parabole recouverte de polymère de silicium contenant un tampon.

Disséquez une section de tissu de l’hémisphère autour de l’artère cérébrale moyenne, ou MCA, avec le segment de tissu supérieur s’étendant au-delà du point de ramification du cercle de Willis.

Fixez le tissu avec le MCA vers le haut.

Retirez la pie-mère, avec les artérioles, qui se ramifient à partir du MCA.

Fixez la pie-mère avec les artérioles. Disséquez l’artériole et retirez les tissus environnants. Jetez toutes les branches distales.

Incuber l’artériole dans un cocktail d’enzymes protéolytiques pour faciliter la digestion partielle du segment.

Remplacez les enzymes par un tampon et transférez le segment digéré dans une chambre contenant un tampon sur une platine de microscope équipée d’une pipette de trituration.

Pipetez l’artériole à plusieurs reprises pour enlever les adventices relâchées et les cellules musculaires lisses, ce qui permet d’obtenir un tube intact contenant des cellules endothéliales artériolaires.

Placez le côté ventral du cerveau vers le haut dans une chambre contenant une solution de dissection froide pour isoler les artérioles p