Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:27 min • July 8th, 2025
Prenez une queue de bovin.
Retirez les tissus sus-jacents et les apophyses vertébrales, puis coupez transversalement pour obtenir des segments.
Identifiez le disque intervertébral ou IVD, situé entre les plaques de croissance et les plaques d’extrémité vertébrales.
Coupez de chaque côté de l’IVD et placez-le dans un plat contenant de la gaze imbibée de tampon pour maintenir la viabilité des tissus.
Grattez tout tissu vertébral attaché et mesurez la hauteur du DIV.
Laver avec un tampon pour éliminer les restes de sang et désinfecter le DIV dans un tampon contenant des antibiotiques.
Placez les IVD dans des chambres de bioréacteur contenant des fluides.
Le milieu du groupe physiologique a un taux de glucose élevé, tandis que dans le groupe pathologique, un milieu à faible teneur en glucose induit une privation de nutriments.
Placez les chambres dans le bioréacteur.
Pour l’IVD physiologique, appliquer une charge douce quotidiennement. Pour le diagnostic in vitro pathologique, appliquer quotidiennement une charge intense à un taux plus élevé.
Entre les tests de charge quotidiens, laissez les IVD se récupérer dans les milieux.
Après toutes les procédures de chargement, mesurez les hauteurs IVD.
Une taille réduite dans les IVD pathologiques indique une condition dégénérative et pro-inflammatoire.
Commencez par rincer abondamment toute la queue de bovin à l’eau du robinet pour éliminer la saleté et les poils à la surface. Ensuite, plongez la queue dans une solution de bétadine à 1 % pendant 10 minutes pour désinfecter la surface. À l’aide d’un scalpel numéro 20, vous pouvez retirer les tissus mous de la colonne caudale afin de faciliter l’identification des disques intervertébraux ou DIV.
Retirez les apophyses épineuses et transversales des vertèbres à l’aide d’une pince pour enlever les os. Coupez transversalement avec une pince à os au milieu de chaque corps vertébral pour obtenir des segments de mouvement individuels, puis placez les segments de mouvement collectés dans une boîte de Pétri avec une gaze imbibée de solution de Ringer.
Localisez l’IVD et les vertèbres en déplaçant doucement les segments de mouvement. Ensuite, identifiez l’emplacement de la plaque de croissance en touchant et en trouvant le côté convexe de la plaque d’extrémité osseuse. Refroidissez la lame de la scie à ruban avec la solution de Ringer et utilisez-la pour faire deux coupes parallèles dans la plaque de croissance des IVD, une de chaque côté.
Transférez les IVD dans une boîte de Pétri propre avec de la gaze propre imbibée de solution de Ringer. Grattez le corps vertébral et la plaque de croissance à l’aide de la lame du scalpel, en laissant la plaque d’extrémité intacte. Positionnez les deux surfaces à plat et parallèlement pour la procédure de chargement, et transférez les IVD grattés dans une boîte de Pétri fraîche avec de la gaze imbibée de solution de Ringer.
Mesurez la hauteur et le diamètre du disque à l’aide d’un pied à coulisse. Ensuite, nettoyez les caillots sanguins dans l’os des vertèbres avec la solution de Ringer à l’aide d’un système de lavage par jet. Désinfectez les DIV dans du PBS et de la pénicilline-streptomycine à 10 %, en agitant pendant 15 minutes. Rincez les antibiotiques à haute concentration avec du PBS et de la pénicilline streptomycine à 1 %.
Transférez les disques dans des chambres IVD contenant 5 millilitres de milieu de culture IVD et placez-les dans le système de bioréacteur avec un incubateur à 37 degrés Celsius avec 85 % d’humidité et 5 % de dioxyde de carbone. Cultivez les disques pendant quatre jours dans un système de bioréacteur en maintenant des conditions de charge différentes selon les groupes expérimentaux.
Dans le groupe témoin physiologique, cultivez les DIV avec un milieu à haute teneur en glucose en utilisant un protocole de charge de 0,02 à 0,2 mégapascals et 0,2 Hertz pendant deux heures par jour. Dans le groupe pathologique, cultiver les IVD avec un milieu à faible teneur en glucose en utilisant un protocole de charge de 0,32 à 0,5 mégapascals et 5 Hertz pendant deux heures par jour.
Entre les procédures de chargement, placez les DIV dans des plaques à six puits avec 7 millilitres de milieu de culture IVD pour une récupération libre de l’enflure. Mesurez quotidiennement la hauteur du disque avec un pied à coulisse après la période de gonflement libre et après la charge dynamique pendant la durée expérimentale.