Obtention de tranches horizontales de cerveau d’hippocampe de souris

Prenez les hémisphères cérébraux de souris dans une solution à haute teneur en saccharose. Fixez les hémisphères avec leur face ventrale vers le haut sur une plaque d’échantillon de vibratome à l’aide d’un adhésif.

Transférez la plaque d’échantillon dans la chambre de tranchage.

Ajoutez une solution semi-congelée à haute teneur en saccharose pour maintenir les conditions physiologiques du tissu et solidifier l’adhésif.

Fournir un mélange de dioxyde de carbone-oxygène pour maintenir l’oxygénation des tissus.

À l’aide des paramètres définis, obtenez les tranches initiales et retirez-les. De plus, obtenez des tranches horizontales d’hippocampe.

Transférez soigneusement ces tranches de cerveau dans une chambre contenant de l’ACSF pour la récupération des tissus.

Les tranches horizontales de l’hippocampe sont prêtes pour d’autres expérimentations.

Placez les deux hémisphères sur la face dorsale fraîchement coupée avec la partie ventrale du cerveau vers le haut, et placez une goutte de superglue sur une plaque d’échantillon. Utilisez une pointe de pipette pour étaler la colle dans une grande zone afin d’accueillir les deux morceaux de tissu, et touchez un morceau de sangle de papier filtre sur la face ventrale d’un hémisphère. À l’aide d’une autre sangle en papier filtre, faites demi-sécher soigneusement la face dorsale du cerveau et placez la face dorsale de l’hémisphère vers le bas sur la colle de la plaque d’échantillon.

Utilisez deux sangles de papier filtre supplémentaires pour positionner le deuxième hémisphère sur la colle comme nous venons de le démontrer, et placez la plaque d’échantillon dans la chambre de tranchage. Ensuite, rapidement mais soigneusement, couvrez l’assiette d’une solution glacée à haute teneur en saccharose. Pour acquérir des sections du tissu cérébral, positionnez la lame du vibratome devant la face médiale des hémisphères et soulevez la table du vibratome de sorte que la lame soit à la même hauteur que les côtés ventraux des hémisphères, qui sont maintenant orientés vers le haut.

Utilisez la commande du vibratome pour abaisser la lame de 600 microns plus loin dans le sens dorsal et coupez le tissu jusqu’à ce que les deux premières tranches soient complètement séparées des deux hémisphères. Lorsque les deux premières tranches de tissu ont été obtenues, inversez le sens de coupe et abaissez la lame de 300 microns supplémentaires avant de trancher à nouveau. Lorsque l’hippocampe devient visible, utilisez une pipette Pasteur en plastique élargie pour recueillir et transférer les tranches dans la chambre de récupération du bain-marie.