Génération de tranches d’amygdale inclinées à partir d’un cerveau de souris

Prenez le cerveau d’une souris immergé dans un tampon glacé.

Retirez le cervelet et coupez la section antérieure contenant le cortex préfrontal médial, ou mPFC.

Fixez le tissu à un bloc de gélose incliné, qui est collé sur une platine d’échantillon de vibratome.

Fixez des blocs de gélose supplémentaires pour assurer la stabilité pendant le tranchage. Placez la platine à l’intérieur de la chambre de coupe du vibratome remplie d’un tampon glacé oxygéné.

Générer des tranches inclinées contenant l’amygdale qui répondent aux stimuli de peur et aux projections neuronales du mPFC, qui forment des connexions synaptiques dans l’amygdale et régulent son activité.

Les coupes inclinées exposent les projections, permettant l’étude de la connectivité fonctionnelle entre le mPFC et l’amygdale.

Coupez les tranches en deux et placez-les dans une chambre contenant du liquide céphalo-rachidien artificiel oxygéné à température ambiante pour stabiliser le tissu.

Incuber les tranches à la température physiologique pour récupérer le tissu pour les tests en aval.

Utilisez un scalpel pour couper le cervelet. Ensuite, isolez la partie antérieure du cerveau contenant le cortex préfrontal médian. Remplissez la chambre de coupe avec une solution de coupe glacée maintenue à 4 degrés Celsius à l’aide d’une unité de refroidissement. Oxygéner la solution.

Séchez le cerveau avec du papier filtre. Collez le bloc de gélose à 4 % qui a été coupé à un angle de 35 degrés par rapport à l’étape vibratoire, et collez la partie postérieure du tissu cérébral sur ce bloc. Collez deux blocs de gélose supplémentaires devant et derrière le bloc cérébral pour plus de stabilité pendant le tranchage.

Placez la platine avec le tissu attaché dans la chambre de coupe et assurez-vous qu’elle est immergée. Commencez à couper les tranches aiguës. Coupez chaque tranche en deux et transférez-la dans une chambre d’interface alimentée en ACSF oxygéné à température ambiante. Après avoir coupé les tranches d’amygdale aiguë, placez la chambre d’interface dans un bain-marie à 36 degrés Celsius et laissez les tranches récupérer pendant 35 à 45 minutes.