Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:43 min • July 8th, 2025
Prélever du gyrus denté dans le cerveau d’une souris dans un tampon d’homogénéisation froid.
Se dissocier mécaniquement pour libérer les neurones, les cellules gliales et les cellules souches.
Le détergent doux du tampon perméabilise les cellules, libérant des noyaux et d’autres organites.
Filtrez l’homogénat pour éliminer les débris de tissu. Ensuite, centrifugez, retirez les organites et remettez-les en suspension dans le tampon d’homogénéisation pour lyser les cellules intactes.
Centrifugez à nouveau, retirez le surnageant contenant les organites libérés et remettez les noyaux en suspension dans un tampon de lavage.
Filtrez pour éliminer tous les débris, centrifugez et retirez le surnageant.
Introduisez une coloration fluorescente de l’ADN pour marquer tous les noyaux et un anticorps conjugué au fluorophore qui se lie à l’antigène nucléaire neuronal, ou NeuN, marquant les noyaux des neurones.
À l’aide du tri des noyaux activés par fluorescence, identifiez les agrégats ayant une intensité de fluorescence de coloration d’ADN plus élevée et des propriétés de diffusion plus élevées, en séparant les noyaux uniques.
Analyser les noyaux uniques, en séparant les noyaux neuronaux NeuN-po
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