Isolement de la microglie à partir de lésions démyélinisantes du cerveau de souris à l’aide du tri cellulaire activé par magnétoscopie
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:09 min • July 8th, 2025
Disséquer des lésions démyélinisantes colorées du corps calleux d’un cerveau de souris.
Ces lésions contiennent des microglies résidentes du cerveau exprimant l’intégrine de surface cellulaire CD11b.
Prélevez le tissu et ajoutez-y une solution contenant une enzyme protéolytique et de la DNase.
L’enzyme dégrade la matrice extracellulaire, tandis que la DNase dégrade l’ADN libre.
Ajoutez un tampon froid et filtrez la suspension à travers une passoire pour éliminer les amas cellulaires.
Centrifugez, jetez le surnageant et remettez en suspension les cellules granulées dans un milieu à gradient de densité.
Recouvrir d’un tampon et d’une centrifugeuse pour recueillir les débris restants dans les couches supérieures ; les cellules intactes se déposent au fond.
Retirez les débris et remettez les cellules en suspension dans une mémoire tampon.
Ajouter des billes magnétiques anti-CD11b pour étiqueter la microglie.
Chargez les cellules sur une colonne contenant des sphères ferromagnétiques placées dans le champ magnétique du séparateur magnétique.
Sous le champ magnétique externe, les microglies liées aux billes sont retenues dans la colonne tandis que les cellules non liées circulent à trave
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