Isolement des cellules immunitaires des plexus choroïdes de souris

Positionnez le cerveau d’une souris côté dorsal vers le haut.

Au microscope, séparez les hémisphères cérébraux. Retirez le cortex puis l’hippocampe pour exposer les ventricules latéraux et le troisième ventricule.

Prélever deux plexus choroïdes latéraux. Il s’agit de structures cérébrales riches en cellules immunitaires qui tapissent les ventricules latéraux comme un long voile.

Prélever le troisième plexus choroïde du ventricule, qui est une structure courte avec une surface granuleuse.

Détachez le cervelet pour exposer le quatrième ventricule.

Prélever le quatrième plexus choroïde du ventricule, qui est une longue structure globulaire avec une surface granuleuse.

Placez tous les plexus choroïdes dans un tube avec une solution saline tamponnée pour maintenir l’intégrité des tissus.

Ajouter une solution d’enzymes digestives et incuber en agissant.

L’enzyme décompose la matrice extracellulaire et détache les cellules.

Ajoutez un tampon approprié pour inactiver l’enzyme.

Centrifugeuse pour décanter les cellules. Jetez le surnageant et remettez les cellules en suspension dans un nouveau tampon pour une analyse plus approfondie.

Pour commencer, positionnez le cerveau disséqué à partir d’une souris C57 Black 6 face dorsale vers le haut dans une boîte de Pétri, et placez la boîte sous les objectifs des loupes binoculaires. Tout en maintenant le cerveau en place à l’aide d’une pince, insérez les deux extrémités d’une autre paire de pinces à travers la ligne médiane entre les hémisphères.

À l’aide de la pince, tirez le cortex avec le calleux et l’hippocampe loin du septum, exposant le ventricule latéral et une partie du troisième ventricule. Identifiez le plexus choroïde latéral comme un long voile tapissant le ventricule latéral et s’évasant aux deux extrémités. Ensuite, à l’aide des deux extrémités d’une pince fine, prélevez le plexus choroïde latéral. Attention à bien prélever la partie postérieure triangulaire cachée par le pli postérieur de l’hippocampe.

Ensuite, tirez le cortex avec le corps calleux et l’hippocampe de l’hémisphère controlatéral, loin du septum pour exposer tout le troisième ventricule et le ventricule latéral opposé. À l’aide d’une pince fine, prélever le troisième plexus choroïde identifié comme une structure courte avec un aspect de surface granuleuse. Ensuite, récupérez l’autre plexus choroïde latéral.

Ensuite, insérez les deux extrémités de la pince entre le cervelet et le mésencéphale et détachez le cervelet du pont et de la moelle pour exposer le quatrième ventricule. Ensuite, identifiez le quatrième plexus choroïde comme une longue structure globulaire avec un aspect de surface granulaire qui tapisse le quatrième ventricule de l’extrémité latérale droite à l’extrémité gauche entre le cervelet et la moelle. À l’aide d’une pince fine, prélevez le quatrième plexus choroïde.

Après avoir incubé tous les plexus choroïdes collectés avec de la collagénase IV, pipetez doucement de haut en bas environ 10 fois pour finaliser la dissociation. Ensuite, remplissez le tube à 1,5 millilitres avec un tampon MACS pour arrêter l’activité de la collagénase IV. Ensuite, centrifugez les cellules et jetez le surnageant avant de laver les cellules avec 1,5 millilitre de tampon MACS. Après avoir ajouté les billes de compensation et les solutions d’anticorps appropriées, incubez les échantillons sur de la glace pendant 30 à 45 minutes, en les protégeant de l’exposition à la lumière. Ensuite, remplissez les tubes avec 1,5 millilitre de tampon MACS.