Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:00 min • July 8th, 2025
Prenez des fragments d’hippocampe de rat perfusés.
Incuber avec de la papaïne pour digérer la matrice extracellulaire du tissu et détacher les cellules, y compris les neurones, les astrocytes et la microglie.
Ajouter DNase et mélanger.
Dissocier mécaniquement le tissu à l’aide de pipettes de diamètres progressivement décroissants pour obtenir une suspension unicellulaire. Incuber pour que la DNase dégrade l’ADN contaminant.
Passez la suspension dans une passoire en enlevant les débris.
Ajouter un tampon contenant des ions divalents pour arrêter l’activité enzymatique.
Centrifugez et retirez le surnageant riche en enzymes.
Maintenant, ajoutez un tampon et des billes magnétiques anti-myéline. Incuber pour que les billes lient les débris de myéline.
Après l’incubation, centrifugez et retirez le surnageant.
Remettez le mélange en suspension dans le tampon et chargez-le sur une colonne de séparation magnétique contenant des sphères ferromagnétiques placées dans le champ magnétique du trieur magnétique.
Le champ magnétique retient les débris de myéline liés aux billes magnétiques dans la colonne tandis que les cellules sans myéline passent à travers.
Lavez la colonne avec un tampon et ré
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques