JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:10 min • July 8th, 2025
Prendre une suspension de cellules obtenues à partir de vers transgéniques Caenorhabditis elegans dans un milieu de culture.
La suspension contient des cellules de divers tissus, y compris des neurones du système nerveux.
Les vers transgéniques ont été modifiés pour exprimer une protéine fluorescente conjuguée à un transporteur transmembranaire vésiculaire. Ce transporteur, présent sur les vésicules synaptiques transportant le neurotransmetteur acétylcholine, se trouve dans les neurones cholinergiques de tout le corps.
Centrifuger la suspension cellulaire et jeter le surnageant. Remettez les cellules en suspension dans un milieu de culture frais pour le tri cellulaire activé par fluorescence, ou FACS.
Analysez la suspension cellulaire à l’aide de FACS. Les neurones cholinergiques marqués par fluorescence émettent une fluorescence lorsqu’ils sont exposés à une lumière d’une longueur d’onde appropriée, les séparant des autres cellules non marquées.
Transférez les neurones isolés dans une plaque multi-puits. Incuber les cellules dans une chambre humidifiée pour maintenir le niveau d’humidité.
Centrifuger les cellules à partir de la suspension cellulaire isolée à 10 000 fois g et à 4 degrés Celsius pendant 5 minutes. Jetez le surnageant et remettez en suspension les cellules granulées dans un milieu supplémenté en L-15 jusqu’à une densité cellulaire ne dépassant pas 6 millions de cellules par millilitre pour éviter de surcharger le cytomètre en flux. Ensuite, triez les cellules par expression GFP-positive à l’aide d’un cytomètre en flux capable de trier les échantillons.
Les cellules GFP négatives peuvent être utilisées comme contrôle pour l’analyse non spécifique au type de cellule. Après cela, plaquez les cellules isolées dans les puits d’une plaque stérile à six puits. Placez l’assiette dans un récipient en plastique. Ajoutez une lingette humide ou du papier de soie doux pour ajouter de l’humidité aux cellules et incubez à 20 degrés Celsius.