Obtention de tranches de cervelet à partir d’un cerveau de poussin embryonnaire

Prenez un œuf de poule fécondé à un stade de développement approprié.

Coupez la coquille pour accéder à l’embryon.

Localisez et disséquez la tête, puis transférez-la dans une boîte de Pétri contenant un tampon de phosphate réfrigéré.

Retirez les yeux et les mâchoires.

Séparez la peau de la surface du crâne.

Ensuite, coupez et retirez les os du crâne.

Nettoyez le tissu conjonctif environnant pour exposer le cerveau.

Séparez le cerveau antérieur.

Ensuite, détachez le cervelet du cerveau postérieur et du vaisseau sanguin.

Transférez le cervelet dans un tampon de sel réfrigéré.

Le cervelet embryonnaire contient une couche de cellules progénitrices neuronales à division rapide, ce qui le rend précieux pour les études de neurogenèse.

Placez le cervelet sur la plate-forme d’un hachoir à tissus.

Retirez l’excès de tampon et coupez le cervelet en tranches.

Mettez un tampon de sel réfrigéré sur les tranches.

Transférez les tranches de cervelet dans une boîte de Pétri contenant un tampon de sel réfrigéré.

Au microscope, séparez les coupes individuelles pour une analyse plus approfondie.

Pour commencer, placez les œufs de poule bruns fécondés dans un incubateur d’œufs à 38 degrés Celsius jusqu’à ce qu’ils atteignent le 14e jour embryonnaire. Au 14e jour embryonnaire, découpez une ouverture dans l’œuf pour exposer l’embryon et décapitez l’embryon de poussin in ovo. Placez la tête dans une boîte de Pétri contenant du PBS glacé.

Sous un microscope à dissection, utilisez une pince standard pour faire une incision derrière chaque œil, tout au long du tissu, et retirer les yeux et la mâchoire supérieure. Ensuite, faites une deuxième incision tout au long du pharynx pour retirer la mâchoire inférieure. Ensuite, utilisez une pince standard pour retirer la peau de la surface du crâne en la décollant. Ensuite, retirez les os frontaux et pariétaux, révélant le cerveau.

D’une face ventrale, retirer le cartilage pharyngé et le mésenchyme auxiliaire. Ensuite, placez le cerveau, côté dorsal vers le haut et retirez soigneusement le mésenchyme, dorsal au cerveau postérieur, en prenant soin de ne pas endommager la pie. Ensuite, faites une incision tout au long du tissu entre le mésencéphale et le cerveau postérieur pour détacher le cerveau postérieur, y compris le cervelet. Faites des incisions tout au long du tissu aux jonctions latérales du cervelet et de la plaque alaire du cerveau postérieur. Retirez tout le cervelet en prenant soin de maintenir l’intégrité de la pie, tout au long de la dissection.

Enfin, retirez le plexus choroïde en formation et déplacez le cervelet disséqué dans le HBSS glacé. Transférez l’ensemble du cervelet sur la plate-forme stérile d’un hachoir à tissus, à l’aide d’une spatule ou d’une pipette Pasteur de 3 millilitres avec la pointe coupée pour élargir l’ouverture. Retirez tout excès de liquide à l’aide d’une pipette.

Réglez la vitesse de coupe du hachoir à tissus à 50 % de sa valeur maximale. Ensuite, coupez le cervelet dans l’orientation requise à une épaisseur de 300 micromètres. À l’aide d’une pipette Pasteur de 3 millilitres, recouvrez le cervelet tranché de HBSS froid.

Ensuite, transférez le HBSS et les tranches dans une boîte de Pétri de 60 millimètres contenant 20 millilitres de HBSS glacée, à l’aide de la pipette Pasteur de 3 millilitres avec la pointe coupée. Placez la boîte de Pétri sous un microscope à dissection, éclairé par une source lumineuse à fibre optique. Ensuite, utilisez une pince d’horloger pour séparer des tranches individuelles de tissu cérébral.