Différenciation des cellules progénitrices otiques en cellules épithéliales sensorielles suivie d’un immunomarquage
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:55 min • July 8th, 2025
La culture a immortalisé les cellules progénitrices otiques multipotentes, ou iMOP, dans les milieux.
Les facteurs de croissance dans les milieux facilitent la prolifération de l’iMOP et la formation de colonies, créant ainsi des otosphères.
Collectez les otosphères et laissez-les se déposer par gravité.
Retirer le média et ajouter un milieu de différenciation dépourvu de facteurs de croissance. Plaquez les otosphères.
L’absence de facteurs de croissance initie la différenciation d’iMOP en cellules épithéliales sensorielles.
Collectez les otosphères différenciés et laissez-les se déposer.
Retirez le support et ajoutez un fixateur pour préserver la morphologie cellulaire.
Ensuite, ajoutez un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires et nucléaires.
Ajoutez un tampon de blocage pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Introduire des anticorps primaires ciblant un marqueur de différenciation spécifique.
Ajoutez des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores ciblant les anticorps primaires, de la phalloïdine marquée par fluorescence pour colorer l’actine et un colorant de liaison à l’ADN pour colorer les noyaux.
Montez les otosphères.
À l’aide de la micro
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