Différenciation des progéniteurs otiques multipotents immortalisés en neurones ganglionnaires spiralés et évaluation de la différenciation
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:14 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multipuits contenant des lamelles stériles recouvertes d’un substrat de culture cellulaire.
Introduire des progéniteurs otiques multipotents immortalisés, ou iMOP, dans un milieu de différenciation neuronale.
Les iMOP sont des précurseurs de diverses cellules de l’oreille interne, y compris les neurones ganglionnaires spiralés, ou SGN, qui transmettent des informations auditives au cerveau.
Incuber, permettant aux cellules d’adhérer au substrat. Le milieu induit une différenciation des iMOP en SGN.
Ajoutez un fixateur pour induire la réticulation des protéines, préservant ainsi la morphologie cellulaire, et une solution détergente pour perméabiliser les membranes cellulaires.
Introduire un réactif bloquant pour éviter l’étiquetage non spécifique.
Ajoutez des anticorps conjugués aux fluorophores spécifiques des marqueurs de différenciation neuronale et incubez, permettant aux anticorps de marquer les SGN.
Lavez pour éliminer les anticorps non liés et fixez les lamelles avec un milieu de montage contenant une coloration nucléaire fluorescente.
À l’aide de la microscopie à fluorescence, détectez les signaux d’anticorps pour confirmer la différenciation des iMOPs en S
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques