Culture ex vivo et imagerie de tranches oculomotrices d’embryons de souris transgéniques

Prenez une souris transgénique enceinte, isolez chirurgicalement l’utérus contenant des embryons et lavez-le pour éliminer le sang résiduel.

Retirez les embryons contenant des motoneurones marqués par fluorescence et transférez-les dans le couvercle d’une plaque multipuits.

Ajoutez de l’agarose fondue et refroidissez le couvercle pour induire la formation de gel, en intégrant les embryons.

Sous un microscope à fluorescence, alignez les noyaux oculomoteurs et les yeux en ligne et coupez l’agarose parallèlement à la ligne.

Fixez un embryon sur un stade d’échantillon et placez-le dans une chambre de vibratome remplie d’un tampon de tranchage à froid.

À l’aide du vibratome, générez des tranches contenant les noyaux oculomoteurs et les yeux. Les noyaux forment les nerfs oculomoteurs qui contrôlent les mouvements oculaires.

Transférez les tranches sur des inserts de culture à l’intérieur d’une plaque multipuits contenant un milieu de culture et incuber.

À l’aide d’un microscope à fluorescence, imagez à intervalles réguliers pour observer les neurones oculomotrices marqués par fluorescence qui étendent les axones jusqu’aux yeux.

Avant de commencer la procédure, confirmez d’abord la grosse