Différenciation de cellules souches pluripotentes induites par l’homme en cellules endothéliales microvasculaires cérébrales

Commencez avec une plaque multi-puits contenant des cellules souches pluripotentes induites par l’homme, ou iPSC, dans un milieu avec un inhibiteur de la Rho-kinase, qui favorise la survie cellulaire.

Remplacez le milieu par un milieu essentiel contenant des nutriments et des facteurs de croissance.

Incuber pour permettre la prolifération et la différenciation des iPSC en cellules précurseurs.

Remplacer ce milieu par un milieu de différenciation complété par des facteurs de croissance des fibroblastes et de l’acide rétinoïque, puis incuber.

Les facteurs de croissance facilitent la différenciation des cellules précurseurs en cellules endothéliales microvasculaires, tandis que l’acide rétinoïque favorise la synthèse des protéines des jonctions serrées.

Lavez et traitez les cellules avec une solution d’enzyme-EDTA pour détacher les cellules, créant ainsi une suspension unicellulaire.

Centrifugeuse pour collecter les cellules et éliminer le surnageant. Ensuite, mettez les cellules en suspension dans un nouveau milieu de différenciation.

Ensemencez cette suspension cellulaire dans une plaque multi-puits recouverte de collagène et de protéines d’adhésion.

Incuber pour permettre l’adhésio