Infection des neurones primaires du mésencéphale de souris avec des virus adéno-associés modifiés

Commencez par une culture de cellules embryonnaires du mésencéphale de souris sur une lamelle.

Traiter avec des virus adéno-associés modifiés codant pour un complexe indicateur de calcium fluorescent sous un promoteur spécifique au neurone.

Incuber pour l’attachement et l’internalisation viraux.

Retirez le milieu pour éliminer les virus non liés, puis ajoutez un milieu de culture et incuberez.

Les virus internalisés libèrent leur génome dans le noyau, où le promoteur spécifique des neurones entraîne la production de complexes indicateurs calciques exclusivement dans les neurones primaires.

Ces complexes comprennent une protéine fluorescente marquée avec une protéine de liaison au calcium et un peptide M13.

Transférez la lamelle dans une parabole avec un tampon d’enregistrement riche en ions calcium, puis placez-la dans une chambre d’enregistrement pour l’imagerie confocale en direct.

Introduisez un tampon d’enregistrement du glutamate, ce qui fait que le glutamate se lie aux canaux ioniques, conduisant à l’entrée des ions calcium.

Ces ions se lient au complexe, provoquant un changement de conformation et une émission de fluorescence.

Dans l’imagerie en direct, les neurones brillant