Dissection et montage d’explants de cerveau de larves de mouches des fruits

Commencez par les larves de drosophile, une mouche des fruits, dans une solution saline physiologique à l’intérieur d’un plat. La solution empêche les larves de se déshydrater.

À l’aide d’un microscope de dissection, localisez l’extrémité antérieure des larves à l’aide des crochets buccaux.

L’extrémité antérieure contient les disques oculaires et le système nerveux central, ou SNC, qui comprend les lobes cérébraux et un cordon nerveux ventral.

Tenez l’extrémité postérieure de la larve à l’aide d’une pince. Avec une autre paire de pinces, tirez sur l’extrémité antérieure pour extraire les organes internes.

Retirez l’intestin et les muscles attachés pour isoler le SNC attaché aux disques oculaires.

Pour monter l’explant de cerveau, transférez le tissu extrait dans la solution saline enfermée dans une barrière de graisse sur une lame de verre.

Assurez-vous que la face dorsale de l’explant est tournée vers le haut et scellez le tissu avec une lamelle. L’explant cérébral est prêt pour l’analyse.

Pour prélever des cerveaux sur des larves de drosophile, sous un microscope à dissection, utilisez une paire de pinces de dissection à pointe standard numéro 5 pour maintenir un échantillon larvaire en place, tandis que vous utilisez l’autre pour disséquer soigneusement le cerveau, en préservant les disques oculaires, les lobes cérébraux et le cordon nerveux ventral. Ensuite, retirez les muscles attachés pour minimiser tout mouvement de l’échantillon pendant l’imagerie. Lorsque tous les cerveaux ont été récoltés, utilisez de la graisse sous vide pour dessiner une chambre carrée sur une lame de verre et ajoutez 20 microlitres de solution saline externe dans la chambre.

Utilisez la pince pour transférer les cerveaux dans la chambre et ajustez les positions des cerveaux au microscope, avec les côtés dorsaux vers le haut. Couvrez la chambre avec une lamelle en verre et appuyez doucement sur la lamelle pour réduire la dérive de l’échantillon pendant la procédure d’imagerie.