Développement et maintien de corps embryoïdes sans sérum

Commencez avec une cellule progénitrice neurale ou des agrégats NPC contenant bien dans les milieux de différenciation-1 ou DM-1.

Ces NPC sont des précurseurs de la lignée neurale générée à partir de cellules souches pluripotentes induites par l’homme, ou hiPSC, à l’aide de DM-1 dans des conditions contrôlées.

Transférez les agrégats NPC sur un insert de membrane placé à l’intérieur d’un puits contenant du DM-1 et retirez l’excès de média.

Changez le milieu en DM-2 et incubez.

DM-2 fournit des nutriments et des facteurs de différenciation qui favorisent la maturation des NPC en différents types de cellules neurales.

Les NPC indifférenciés se transforment en corps embryoïdes, connus sous le nom de corps embryoïdes sans sérum ou SFEB, car le milieu manque de sérum. Ces EB ressemblent à la morphologie d’un cerveau en développement.

Transférez l’insert dans un puits contenant du DM-3.

Le DM-3 contient des facteurs de croissance essentiels à l’entretien et à la croissance des SFEB.

Incuber jusqu’à ce que les SFEB atteignent la taille souhaitée.

Après deux semaines de culture des cellules, préparez des plaques à six puits avec des inserts de culture cellulaire de 40 microns et 1 millilit