Différenciation de cellules souches pluripotentes induites par l’homme en motoneurones fonctionnels
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:29 min • July 8th, 2025
Prenons l’exemple de colonies de cellules souches pluripotentes induites humaines, ou iPSC, cultivées sur une plaque recouverte d’une matrice extracellulaire.
Les iPSC sont génétiquement modifiées pour exprimer des facteurs de transcription qui induisent la différenciation des motoneurones.
Retirez le milieu et ajoutez des enzymes pour détacher les colonies.
Dissociez mécaniquement les cellules en une suspension unicellulaire et collectez-les.
Centrifugez et retirez le surnageant.
Remettre les cellules en suspension dans un milieu contenant un inhibiteur qui empêche l’apoptose cellulaire.
Déposer les cellules sur un plat enrobé de matrice.
Ajoutez un nouveau milieu de différenciation contenant l’antibiotique doxycycline et des inhibiteurs de petites molécules.
La doxycycline induit l’expression des facteurs de transcription, tandis que les inhibiteurs bloquent des voies de signalisation spécifiques, favorisant la différenciation des iPSC en progéniteurs des motoneurones.
Ajoutez des enzymes pour détacher les cellules.
Récupérez les cellules et dissociez-les mécaniquement.
Centrifugez et jetez le surnageant. Remettre les cellules en suspension dans les milieux neuronaux.
Plaquez les
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