Génération d’un modèle de co-culture 3D de fibroblastes et de neurones cornéens humains

Prenez les fibroblastes cornéens humains.

Transférez-les dans un insert à membrane à l’intérieur d’une plaque multipuits contenant un support.

Ajoutez du support dans l’insert de membrane. Incuber pour l’adhérence des fibroblastes à l’insert.

Ensuite, remplacez le média par un média contenant de la vitamine C dans l’insert de la membrane et le réservoir.

couver. La vitamine C stimule les fibroblastes à sécréter et à assembler une matrice extracellulaire 3D.

Ajouter une suspension de cellules de neuroblastome humain sur les fibroblastes.

Incuber, permettant l’adhésion des cellules du neuroblastome.

Maintenant, ajoutez un milieu contenant de l’acide rétinoïque sur les cellules et complétez le réservoir avec un milieu frais.

couver. L’acide rétinoïque déclenche la différenciation des cellules du neuroblastome en cellules progénitrices neurales.

Ensuite, retirez le support. Introduisez un média frais dans le réservoir. Ajoutez un milieu contenant un facteur neurotrophique dans l’insert membranaire et incuber.

Les facteurs neurotrophiques déclenchent la différenciation des cellules progénitrices en neurones, générant un modèle de co-culture 3D de fibroblastes et de neurones cornéens hum